trừu tượng
Sâu keo mùa thu, Spodoptera frugiperda, là một trong những loài gây hại quan trọng nhất trên ngô, mới xâm nhập vào Trung Quốc. Để xác định hiệu quả phòng trừ của Autographa californiaica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) trên ấu trùng S.frugiperda, hoạt tính diệt côn trùng và tác dụng kiểm soát sinh học của AcMNPV đối với S.frugiperda đã được nghiên cứu và phân tích bằng phương pháp xét nghiệm sinh học và thử nghiệm hiệu quả trên đồng ruộng. Kết quả cho thấy nồng độ gây chết trung bình (LC)50) của AcMNPV tác động lên 2thứấu trùng tuổi S.Frugiperda là 2,9 lần 107PIB/mL. Hiệu quả kiểm soát trung bình là 107Huyền phù PIB/mL AcMNPV+Bt(1500 mL/hm2) trên S.frugiperda là 68,99% vào ngày 10thngày và 66,87% vào ngày 15thngày sau khi sử dụng. Cuối cùng, phần mềm DNAMAN 6.0 đã được sử dụng để xác định tính tương đồng DNA của côn trùng chết và kết quả cho thấy trình tự gen polh, lef-8 và lef-9 của côn trùng chết và S．Frugiperda là 100 % giống nhau. Tất cả các kết quả trên có thể xác minh thêm rằng AcMNPV có thể đóng vai trò quan trọng trong việc kiểm soát S．frugiperda.Có ý kiến cho rằng 107PIB/mL AcMNPV＋bt huyền phù (1500mL/hm2)nên được áp dụng vào thời kỳ cao điểm xuất hiện ấu trùng S.frugiperda, và sau 4:00-5:00 chiều vào ngày nắng để tránh ảnh hưởng của nhiệt độ và ánh sáng cao, để việc chuẩn bị virus có thể phát huy tác dụng tốt hơn vai trò và cải thiện hiệu quả kiểm soát của nó đối với S.frugiperda.
Từ khóa: AcMNPV;Spodoptera frugiperda;loài Lepidopteranpest;ấu trùng;thuốc trừ sâu sinh học;AcMNPV＋Bt đình chỉ;hoạt động diệt côn trùng;phòng ngừa và kiểm soát xanh
Spodoptera frugiperda là loài dịch hại di cư ăn tạp, lần đầu tiên xâm nhập vào Trung Quốc từ Myanmar vào năm 2019 và nhanh chóng lan rộng ra 1.518 huyện ở 26 tỉnh, thành phố ở Trung Quốc, gây ra mối đe dọa nghiêm trọng đối với an ninh lương thực của Trung Quốc. Cho đến nay, trong chiến lược kiểm soát sâu xanh, Việc kiểm soát sự bùng phát của giun quân vẫn phụ thuộc vào việc sử dụng nhiều thuốc trừ sâu hóa học.Việc lạm dụng thuốc trừ sâu hóa học dễ gây sâu bệnh kháng thuốc, tái phát lan tràn và để lại dư lượng, ô nhiễm môi trường.Hàng loạt vấn đề nghiêm trọng đã hạn chế nghiêm trọng sự phát triển bền vững của nền nông nghiệp hiện đại. Do đó, việc sử dụng các phương pháp kiểm soát sinh học hoặc thay thế thuốc trừ sâu sinh học.Việc sử dụng thuốc trừ sâu để phòng trừ sâu keo ngày càng trở nên quan trọng và nhận được nhiều sự quan tâm.
Autographa californiaica multiple nucleopolyhedrovirus AcMNPV là một loại virus đa diện hạt nhân nhúng đa hạt được phân lập từ ấu trùng của cỏ linh lăng Argyria. Nó có thể lây nhiễm chéo hơn 30 loại sâu hại lepidopteran như sâu bướm củ cải, sâu bướm bắp cải, Argyria argyra và Calyptera teristoides, The loại hỗn hợp với Bt và các loại thuốc trừ sâu khác và virus gây hại không phải mục tiêu như chất hiệp đồng có tác dụng hiệp đồng rõ ràng đối với nhiều loài gây hại Noctuidae, đồng thời mở rộng hơn nữa phổ diệt côn trùng và cải thiện hiệu quả diệt côn trùng.AcMNPV là thuốc trừ sâu sinh học mới diệt virus côn trùng được phát triển bởi Công ty TNHH Công nghệ sinh học Unioasis Vũ Hán.Nó là sự kết hợp giữa virus đa diện hạt nhân Argyria alfalfa và chất hiệp đồng mạnh mẽ của virus Bt.Với hoạt tính diệt côn trùng tốt, A đã được ứng dụng rộng rãi trên rau, cây ăn quả, lúa và các lĩnh vực khác.Trong bài báo này, hoạt tính diệt côn trùng và tác dụng kiểm soát sinh học của Autographa californica mul-tiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) chống lại Spodoptera frugiperda đã được phát hiện và đánh giá bằng thử nghiệm hoạt động trong phòng thí nghiệm và thí nghiệm thực địa, nhằm cung cấp dữ liệu hỗ trợ cho việc ứng dụng rộng rãi virus đa diện hạt nhân trong phòng trừ sinh học nấm Spodoptera frugiperda trên ngô.Nó cung cấp cơ sở lý thuyết cho việc đăng ký và ứng dụng chất huyền phù AcMNPV plus Bt trong việc kiểm soát sâu Armyworm.
1.Nguyên liệu và phương pháp
1.1Kiểm tra virus và tác nhân sinh học
Virus được thử nghiệm là Autographa californiaica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) Vào ngày 20 tháng 5 năm 2019, Spodoptera frugiperda đã được thu thập từ cánh đồng ngô ở thành phố Xiantao, tỉnh Hồ Bắc và xét nghiệm sàng lọc nhiễm virus đã được tiến hành trong phòng thí nghiệm của Công ty Công nghệ sinh học Unioasis Vũ Hán. , TNHH.(Trong đó Autographa Californica multiplenucleopolyhedrovirus AcMNPV có hoạt tính lây nhiễm cao đối với Spodoptera frugiperda), Ấu trùng của Spodoptera frugiperda được nuôi để tăng trưởng và lây lan. Ấu trùng chết bị nhiễm virus được nghiền bằng nước, lọc qua 3 lớp gạc và dịch lọc được ly tâm ở tốc độ 600r/phút và 300r/phút. Số lượng vi mô là 1,8 × 1010khối đa diện độc hại trên mỗi mL(Polyhedralininclusionbody PIB), nghĩa là để có được cấp độ kỹ thuật thuần túy của virus đa diện (1,8 x 1010PIB/mL), được bảo quản ở nhiệt độ thấp và để riêng.
Tác nhân sinh học được thử nghiệm là Autographa california nucleotit polyhedrosis.Bacillus thuringiensis viết tắt là AcNPV.Bt(1,0 ×107 PIB/mL).Nó được phát triển bởi Công ty TNHH Công nghệ Sinh học Vũ Hán Unioasis và được sản xuất bởi công ty con Công ty Công nghệ Sinh học Vũ Hán Chuqiang.
1.2Kiểm tra côn trùng
Côn trùng thí nghiệm là Spodoptera frugiperda.Vào ngày 20 tháng 7 năm 2019, ấu trùng của Spodoptera frugiperda được thu thập từ cánh đồng ngô mùa hè ở làng Banqiao, thị trấn Dachangzhen, huyện Tongshan, tỉnh Hồ Bắc và mang về phòng thí nghiệm của Viện nghiên cứu đất và phân bón bảo vệ thực vật thuộc Học viện Nông nghiệp Hồ Bắc Khoa học. Lá ngô tươi và mềm được cho ăn từng đầu trong đĩa petri nhựa dùng một lần (đường kính 8cm, cao 3cm).Điều kiện cho ăn trong nhà là :(25±1) oC và độ ẩm tương đối 60%-70%, chu kỳ quang là 16L:8D.Sau nhiều thế hệ sinh sản, các khối trứng tươi và tiệt trùng được giữ lại để sử dụng.
1.3Hoạt động trong phòng thí nghiệm của Autographa californiaica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) chống lại spodoptera frugiperda
Sáu gradient nồng độ, 1,0 ×109, 1,0 ×10số 8, 1,0 ×107, 1,0 ×106, 1,0 ×105, 1,0 ×104được thiết kế trong thí nghiệm này. Đầu tiên, TC của AcNPV được pha loãng thành 1,0 ×109PIB/mL, sau đó pha loãng 10 lần để thu được các chất pha loãng khác có nồng độ khác nhau. Thí nghiệm được xử lý bằng mẫu trắng. Tổng cộng có 7 quy trình được thực hiện, mỗi quy trình được lặp lại 3 lần.
Phương pháp cho ăn theo từng đoạn lá đã được áp dụng, tức là lá ngô non tươi (dài 2 cm × rộng 2 cm) trước tiên được xử lý bằng phun huyền phù vi rút, sau đó cho ấu trùng ăn và cho ăn một đầu trong đĩa petri.Các dải cho ăn là: nhiệt độ (25±1)oC, pha đến độ ẩm (60% ~ 70%), chu kỳ quang (16L: 8D). Sau khi ăn lá ngô độc, nên thêm lá ngô tươi không độc vào ngay lập tức.48 ấu trùng giun quân ở tuổi thứ hai được xử lý lặp đi lặp lại. Phần tham khảo 9{9-11}, Xem xét sự thay đổi về sự sinh sôi của vi rút trong tế bào và vật chủ của họ bướm đêm, số lượng côn trùng chết do vi rút và tổng số côn trùng chết được điều tra vào lúc 7 và 10 ngày sau khi nhiễm bệnh, tỷ lệ tử vong được tính toán và LC50 được tính toán.
1.4Thử nghiệm thực địa về hiệu quả kiểm soát của 10 triệu huyền phù AcMNPV.Bt trên ấu trùng Armyworm
Thử nghiệm hiệu quả trên đồng ruộng được tiến hành trên cánh đồng ngô mùa hè ở làng Xiaoyuan, thị trấn Chuangwang, huyện Tongshan, tỉnh Hồ Bắc.Ô thử nghiệm có tổng diện tích 1500m２, loại đất là đất canxi, độ pH là 6,8, hàm lượng chất hữu cơ là 13,9%, độ phì từ trung bình đến cao. Ngô được trồng quanh năm và giống ngô là Xiyu số 3. Ngày 13 tháng 7 ,2020, 45% phân hỗn hợp 750kg//hm２sẽ được bón làm phân bón lót và gieo trồng.Từ năm 2019, sâu xanh mùa thu xuất hiện nghiêm trọng trên ruộng này.
Tổng cộng có 10 triệu huyền phù AcMNPV.BT (1500mL/hm2) và 15% emamectin benzoate. Hỗn dịch Indocarb (300mL/ hm2), thuốc trừ sâu thường dùng và đối chứng trống được xử lý bằng 3 nghiệm thức.Mỗi nghiệm thức được lặp lại 4 lần, với tổng số 12 ô thí nghiệm, mỗi ô có diện tích 100m.2
Chiều ngày 26/8/2020 (thời điểm ấu trùng Spodoptera frugiperda xuất hiện thường xuyên), phun thuốc trừ sâu 1 lần vào buổi tối.Máy phun điện ba lô đa chức năng 3WBJ-16DZ của thương hiệu Lebang được sử dụng, với áp suất làm việc 0,40 ~ 0,60 MPa, đường kính lỗ 1mm và tốc độ dòng chảy 60 ~ 85L/h.Ngày phun thuốc trừ sâu có nắng, nhiệt độ 23-32oC.Tiến hành khảo sát vào các ngày thứ 1, 3, 5, 7, 10 và 15 sau khi nộp đơn.Trong quá trình điều tra, mỗi ô lấy mẫu ngẫu nhiên 10 điểm, mỗi điểm điều tra liên tục 10 cây, tổng cộng là 100 cây.Số lượng côn trùng sống, chết, ngộ độc, thiên địch trên mỗi cây ngô đều được ghi nhận.Công thức tính toán liên quan như sau;
Giảm tỷ lệ côn trùng = (số lượng côn trùng sống trước khi phun - số lượng côn trùng sống sau khi phun)/số lượng côn trùng sống trước khi phun
Hiệu quả phòng ngừa và kiểm soát=( Giảm tỷ lệ côn trùng ở vùng điều trị- Giảm tỷ lệ côn trùng ở vùng đối chứng)/(100- Giảm tỷ lệ côn trùng ở vùng đối chứng)*100%
1,5Nhận dạng phân tử của ACMNPV
1) Kiểm tra mẫu virus.Chọn rượu mẹ ACMNPV để xác định hoạt tính trong nhà (mẫu 1), chuẩn bị sinh học 10 triệu ACMNPV.Bt SC (mẫu 2), xác côn trùng nhiễm vi rút sau khi thử nghiệm hiệu quả tại hiện trường (mẫu 3) và ấu trùng giun quân thế hệ thứ hai bị nhiễm vi rút xác côn trùng được thu thập trong mẫu 3 (mẫu 4) làm mẫu virus thử nghiệm, để xác minh xem AcMNPV trong 10 triệu ACMNPV.Bt có hoạt tính diệt khuẩn đối với ấu trùng giun quân mùa thu hay không.
2) trích xuất DNA.Lấy 1,0 mL mẫu AcMNPV, thêm 99,0 mL nước cất và lắc kỹ trong 1 phút.Lấy huyền phù 300μL sau khi dao động, thêm 100μL dung dịch kiềm kiềm, tắm nước ở 37oC trong 30 phút.Thêm 200μL đệm Tris·HCl và ly tâm ở tốc độ 10000 vòng/phút trong 8 phút.Lấy phần nổi phía trên vào ống ly tâm, thêm 5μL Protease K và 60 μL SDS, cách thủy ở 65oC trong 2 giờ, loại bỏ và làm nguội đến nhiệt độ phòng.Thêm 650μL Trộn đều phenol bão hòa Tris, ly tâm ở tốc độ 10000 vòng/phút trong 5 phút và lấy phần nổi phía trên vào ống ly tâm mới.Thêm 650μL hỗn hợp chất lỏng phenol và hỗn hợp cloroform (tỷ lệ thể tích 1:1), ly tâm ở tốc độ 10000 r/phút trong 5 phút, sau đó lấy phần nổi phía trên vào ống ly tâm mới.Thêm 650μL chất lỏng hỗn hợp của rượu chloroform và isoamyl (tỷ lệ thể tích 24:1), ly tâm ở tốc độ 10000 vòng/phút trong 5 phút và cuối cùng lấy phần nổi phía trên vào ống ly tâm mới.Đo nồng độ DNA bằng máy đo quang phổ.
3) khuếch đại PCR.Sử dụng hệ thống chuẩn supermix T3: DNA mẫu 2 μL. Mồi trước và sau 0,5μL, T3 super mix 18μL và ddH₂O7μL.Điều kiện khuếch đại PCR là 95oC.Sau 3 phút biến tính trước, các chu kỳ sau được thực hiện: 98oC trong 15 giây, 52oC trong 20 giây, 72oC trong 20 giây và cuối cùng là 72oC trong 5 phút, chu kỳ hoàn toàn là 42 lần.
4) Điện di trên gel agarose DNA.Lấy sản phẩm khuếch đại PCR 2μL và DNA Marker 5 kb cho vào gel agarose và điện di ở 180 V trong 20 phút.Sau khi điện di, quan sát sản phẩm PCR trên hệ thống tạo ảnh gel.
Sơn lót ngược dòng Polh:
AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT
Sơn lót hạ lưu Polh:
GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT
Sơn lót ngược dòng Lef-8:
AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC
Sơn lót hạ lưu Lef-8:
GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC
Mồi ngược dòng Lef-9
AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG
Sơn lót hạ lưu Lef-9:
GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC
Cuối cùng, áp dụng phần mềm DNAMAN6.0 để so sánh các chuỗi polh, lef-8 và lef-9 đo được.
1.6Phân tích và xử lý dữ liệu
Số liệu thực nghiệm được xử lý bằng phần mềm phân tích thống kê dữ liệu IBM SPSS 22.0.
Trong thí nghiệm xác định hoạt tính diệt côn trùng của vi-rút, số lượng côn trùng chết và sống được xử lý theo từng nồng độ được tính, tỷ lệ tử vong và tỷ lệ chết đã điều chỉnh được tính toán và chuyển đổi thành giá trị xác suất.Nồng độ của mỗi lần xử lý được chuyển đổi thành giá trị lg.Phương trình hồi quy độc lực (độ dốc ± SE) được tính toán thông qua các giá trị và trọng số xác suất làm việc và LC50Giá trị và giới hạn tin cậy 95% của nó và cuối cùng thực hiện kiểm tra chi bình phương (2).Trong thí nghiệm tác dụng phòng trừ ngoài đồng, đếm số lượng côn trùng sống ở mỗi nghiệm thức, tính toán tỷ lệ giảm sâu bệnh.Hiệu ứng kiểm soát được tính toán bằng công thức chỉnh sửa Microsoft Excel.Phương pháp của Duncan được sử dụng để phân tích và ANOVA một chiều được sử dụng để so sánh sự khác biệt đáng kể giữa các phương pháp điều trị,
Các biểu đồ trong văn bản đều được tạo bằng phần mềm Microsoft Excel.
2.Kết quả và phân tích
2.1Hoạt tính diệt côn trùng của AcMNPV đối với ấu trùng Spodoptera frugiperda
Kết quả thử nghiệm hoạt động trong nhà (Bảng 1) cho thấy sau 7 ngày điều trị, LC50AcMNPV tác động lên ấu trùng tuổi 2 của Spodoptera frugiperda là 4,1x107PIB/mL và LC90là 1,05 x10số 8PIB/mL.Sau 10 ngày điều trị, LC50của AcMNPV tác dụng lên ấu trùng tuổi 2 là 2,9x107PIB/mL và LC90là 7,8x107PIB/mL.LC50và LC90Tác dụng của AcMNPV trên ấu trùng giun quân mùa thu tuổi 2 sau 7 ngày điều trị đều cao hơn 10 ngày, cho thấy AcMNPV thể hiện hoạt tính diệt côn trùng tốt đối với ấu trùng Spodoptera frugiperda sau 7 ngày.
2.2 Tác dụng điều khiển trường của AcMNPV.Bt tác động lên ấu trùng Spodoptera frugiperda
Kết quả thử nghiệm hiệu quả trên đồng ruộng cho thấy 10 triệu AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm2) có tác dụng tương đối chậm đối với ấu trùng spodoptera frugiperda.Hiệu quả phòng trừ trung bình vào ngày thứ 1, ngày thứ 3 và ngày thứ 5 sau phun lần lượt là 11,57%, 16,23% và 15,56%.Hiệu quả phòng trừ trung bình ở ngày thứ 7 sau phun chỉ đạt 21,88%.Tuy nhiên, đến ngày thứ 10 sau phun, hiệu quả phòng trừ côn trùng đột ngột tăng lên 68,99%, hiệu quả phòng trừ trung bình vào ngày thứ 15 sau phun cũng là 66,87%.Tuy nhiên, so với hóa chất Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% (300mL/hm2), nó có tác dụng diệt tốt đối với ấu trùng của loài spodoptera frugiperda, có thể nhanh chóng làm giảm số lượng côn trùng.Hiệu quả kiểm soát trung bình vào ngày thứ 1, thứ 3, thứ 5 và thứ 7 sau khi dùng thuốc lần lượt là 91,39%, 92,66%, 90,71% và 87,19%.Tuy nhiên, hiệu quả kiểm soát trung bình vào ngày thứ 10 bắt đầu giảm, chỉ còn 67,63% và hiệu quả kiểm soát trung bình vào ngày thứ 15 đã giảm xuống còn 51,60%.Xem Bảng 2 để biết chi tiết.
Đồng thời, chúng tôi cũng nhận thấy tỷ lệ côn trùng giảm ở vùng đối chứng là âm tính vào ngày thứ 1, thứ 3 và thứ 5 sau khi xử lý, cho thấy số lượng côn trùng tăng lên.Vào ngày thứ 7 sau khi điều trị, nó bắt đầu dương tính (quần thể côn trùng bắt đầu giảm).Tỷ lệ giảm côn trùng trung bình vào ngày thứ 10 và 15 lần lượt là 38,25% và 47,00%, điều này rất có thể liên quan đến việc một số ấu trùng của loài Spodoptera frugiperda bắt đầu hóa nhộng trong đất và các thế hệ chồng lên nhau sau 10-15 ngày. .
Tóm lại có thể thấy rằng 10 triệu AcMNPV.Bt SC (1500 mL/hm2) có tác dụng kiểm soát nhất định đối với spodoptera frugiperda, nhưng tác dụng chậm và hiệu quả là khoảng 10-15 ngày sau khi sử dụng.
2.3 Tác dụng của AcMNPV.Bt trên kẻ thù tự nhiên
Trong quá trình thí nghiệm ngoài đồng ruộng, tác dụng của 10 triệu AcMNPV.Huyền phù Bt đối với thiên địch của sâu hại ngô như nhện, bọ rùa và bọ cánh cứng cũng đã được nghiên cứu.Kết quả cho thấy 10 triệu AcMNPV.Huyền phù Bt không gây thiệt hại đáng kể đối với thiên địch như nhện, bọ rùa và bọ cánh cứng, với trung bình 13,4 thiên địch trên 100 cây.Tuy nhiên, hỗn dịch Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% có tác dụng độc hại đáng kể đối với thiên địch như nhện, bọ rùa, bọ cánh cứng.Ngày đầu tiên sau khi xử lý, số thiên địch trung bình trên 100 cây ngô chỉ là 3,1 và đến ngày thứ ba sau xử lý chỉ tìm thấy 5,2 thiên địch các loại (Hình 1).Có thể thấy rằng 10 triệu AcMNPV.Huyền phù Bt có tác dụng bảo vệ tốt đối với thiên địch của sâu bệnh, trong khi huyền phù Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% gây thiệt hại tương đối lớn hơn cho thiên địch.
2.4 Nhận dạng phân tử AcMNPV
Kết quả khuếch đại PCR của các mẫu thử nghiệm khác nhau cho thấy các đoạn khuếch đại polh, lef-8 và lef-9 của các mẫu 1, 2, 3 và 4 có kích thước đồng đều và chính xác.Sản phẩm PCR của các gen polh, lef-8 và lef-9 lần lượt là 0,54, 0,716 và 0,29 kb (Hình 2), chứng tỏ AcMNPV có hoạt tính diệt côn trùng đối với ấu trùng loài Spodoptera frugiperda.
Cuối cùng, phần mềm DNAMAN 6.0 được sử dụng để thực hiện căn chỉnh trình tự trên các đoạn polh, lef-8 và le.f-9 được khuếch đại trong các mẫu 1, 2, 3 và 4 (Hình 3).Kết quả cho thấy độ tương đồng giữa các trình tự khuếch đại của polh, lef-8 và lef-9 ở các mẫu 1, 2, 3 và 4 là 100%, chứng tỏ các mẫu 1, 2, 3 và 4 đều có nguồn gốc từ cùng loại virus AcMNPV.
3. Thảo luận
AcMNPV là một loại virus hình que côn trùng lây nhiễm vào cơ thể côn trùng thông qua việc ăn uống.Virus sinh sôi và lây lan khắp cơ thể côn trùng, dần dần lây nhiễm toàn bộ cơ thể và cuối cùng dẫn đến tử vong.Kết quả của nghiên cứu này chỉ ra rằng AcMNPV có hoạt tính sinh học tốt chống lại ấu trùng Spodoptera frugiperda.LC của nó ở ngày thứ 7 và ngày thứ 10 lần lượt là 4,1x107 và 2,9x107PIB/m và cho thấy hiệu quả kiểm soát tốt trên đồng ruộng.Huyền phù hỗn hợp 10 triệu AcMNPV.Bt (1500 mL/hm2) có tác dụng kiểm soát trung bình tốt vào ngày thứ 10 và 15 sau điều trị, đạt lần lượt 68,99% và 66,87%, an toàn cho thiên địch.Vì vậy, tốc độ nghiên cứu và phát triển cần được đẩy nhanh để AcMNPV có thể phát huy vai trò lớn hơn trong việc kiểm soát sinh học Spodoptera frugiperda.Huyền phù 10 triệu AcMNPV.Bt do Công ty TNHH Công nghệ sinh học Vũ Hán Chuqiang sản xuất là hợp chất của AcMNPV và thuốc trừ sâu sinh học Bacillus thuringiensis (Bt), có thể cải thiện đáng kể hoạt động diệt côn trùng của virus.Do Bt là thuốc trừ sâu phổ rộng, có hoạt tính diệt côn trùng vi sinh tốt nên khi kết hợp AcMNPV với Bt, độc tính của nó sẽ được cải thiện đáng kể so với sử dụng một công thức đơn lẻ.Điều này không chỉ mở rộng phạm vi diệt côn trùng của Bt mà còn tăng cường độc tính của nó, đạt được mục tiêu sử dụng một công thức duy nhất để kiểm soát nhiều loài gây hại.Đây cũng là lý do vì sao việc đình chỉ 10 triệu AcMNPV.Bt có thể được phát huy rộng rãi trên rau, cây ăn quả, lúa gạo.Do đó, 10 triệu AcMNPV.Bt có thể được quảng bá làm tác nhân kiểm soát xanh đối với loài Spodoptera frugiperda trên ngô
Trong nghiên cứu này, khi tiến hành thử nghiệm hiệu quả trên đồng ruộng, trong trường hợp quần thể côn trùng trong khu vực đối chứng giảm nhanh (tỷ lệ giảm côn trùng vào ngày thứ 15 đạt 47,00%), hiệu quả kiểm soát trung bình là 10 triệu AcMNPV.Bt huyền phù (1500mL/hm2) vào ngày thứ 15 sau điều trị là 66,87%, có xu hướng tăng nhanh.Trong khi hiệu quả kiểm soát trung bình của thuốc trừ sâu hóa học 15% methoxazole · indefencarb SC (300 mL/hm2) ở ngày thứ 15 sau điều trị giảm còn 51,60%.Mặc dù có thể thấy rằng huyền phù 10 triệu AcMNPV.Bt (1500 mL/hm2) có tác dụng phòng trừ nhất định đối với Spodoptera frugiperda vào ngày thứ 10 đến ngày thứ 15. Xét thấy hiệu lực điều tra chậm của thuốc trừ sâu sinh học và tuổi thọ ngắn cũng như các thế hệ ấu trùng Spodoptera frugiperda chồng chéo nhau, nên tăng số lượng điều tra và kéo dài thời gian điều tra khi tiến hành thử nghiệm hiệu quả trên đồng ruộng của thuốc trừ sâu sinh học (đặc biệt là chế phẩm virus), có thể đạt được kết quả thực nghiệm lý tưởng hơn.Đây cũng là hạn chế của nghiên cứu này.Tóm lại, so với các tác nhân sinh học, các tác nhân hóa học có tác dụng diệt sâu bệnh tương đối cao hơn và phát huy tác dụng nhanh chóng.Chúng có thể được sử dụng như một biện pháp phòng ngừa và kiểm soát khẩn cấp trong thời gian dịch hại bùng phát.Khi tác hại của sâu bệnh xảy ra tương đối nhẹ, thuốc trừ sâu sinh học có thể thay thế thuốc trừ sâu hóa học như một trong những biện pháp phòng ngừa và kiểm soát xanh, từ đó giảm ô nhiễm môi trường và đạt được hiệu quả bảo vệ hệ sinh thái nông nghiệp.
Ngoài ra, gen Polh (polyhedrin) được sử dụng trong nghiên cứu này là một loại gen khởi động protein đa diện, nó và P10 là gen khởi động được sử dụng phổ biến nhất trong hệ thống vectơ biểu hiện baculovirus (BEVS), cả hai đều biểu hiện cao ở giai đoạn muộn. nhiễm virus[13].Tuy nhiên, hoạt tính của Promoter p10 thấp hơn so với Promoter polh, vì vậy Promoter polh thường được sử dụng để biểu hiện protein ngoại sinh.Gen lef-8 có thể mã hóa tiểu đơn vị lớn nhất của RNA polymerase của virus và là một loại yếu tố biểu hiện muộn[14].lef-9 là một loại yếu tố biểu hiện muộn đồng mã hóa tiểu đơn vị phức hợp protein với lef-4, lef-8 và p47 trong baculovirus.Nghiên cứu đã phát hiện ra rằng virus thiếu gen lef-9 không thể tạo ra các hạt virus có hoạt động lây nhiễm, trong khi virus có gen lef-9 có thể khôi phục hoạt động lây nhiễm của virus bằng cách khôi phục nó.Vì vậy, gen lef-9 là gen thiết yếu để baculovirus hình thành BV (Budded Virus) có hoạt tính lây nhiễm.[15].Có thể thấy, gen lef-8 và lef-9 có tính bảo thủ cao ở các loại virus đa diện nhân khác nhau nên có thể sử dụng gen lef-8 và lef-9 làm cơ sở để xác định các loại virus.Vì vậy, nghiên cứu này sử dụng polh, lef-8 và lef-9 làm đối tượng phát hiện và thông qua việc căn chỉnh trình tự gen cho độ tương đồng cao, tất cả đều đạt 100%.Phương pháp phát hiện phân tử nhanh một lần nữa khẳng định AcMNPV có hoạt tính diệt côn trùng tốt đối với Spodoptera frugiperda, phù hợp để tiếp tục phát huy và ứng dụng trong việc phòng ngừa và kiểm soát Spodoptera frugiperda.
Từ năm 2019, loài Spodoptera frugiperda đã xâm chiếm Trung Quốc và trở thành loài gây hại ngô quan trọng.Nó đã hình thành một khu dân cư định cư ở một số khu vực phía nam và tây nam Trung Quốc, gây thiệt hại lớn cho ngành ngô của Trung Quốc và đe dọa nghiêm trọng đến an ninh lương thực của Trung Quốc.[16].Đối mặt với tình hình phòng ngừa và kiểm soát Spodoptera frugiperda nghiêm trọng hiện nay ở Trung Quốc, việc đẩy nhanh việc sàng lọc và phát triển các loại thuốc trừ sâu hiệu quả để phòng ngừa và kiểm soát Spodoptera frugiperda là điều cấp thiết.[17].Mặc dù thuốc trừ sâu virus còn hạn chế ứng dụng rộng rãi do tốc độ tác dụng chậm và phổ diệt côn trùng hẹp, nhưng trong bối cảnh ngày càng quan tâm đến sinh thái và bảo vệ môi trường, thuốc trừ sâu baculovirus dự kiến sẽ ngày càng được sử dụng rộng rãi trong sản xuất nông nghiệp do những ưu điểm vượt trội so với thuốc trừ sâu virus. thuốc trừ sâu truyền thống.Do các chế phẩm virus côn trùng rất nhạy cảm với các điều kiện bên ngoài như nhiệt độ cao, nắng, mưa và tuổi sâu bệnh[18].Vì vậy, nên sử dụng thuốc trừ sâu trong thời kỳ cao điểm xuất hiện ấu trùng sâu bệnh.Tốt nhất nên sử dụng sau 4h - 5h chiều vào những ngày nắng để tránh tác động của các điều kiện môi trường bất lợi như nhiệt độ và ánh sáng cao, để công thức virus phát huy tốt hơn vai trò và nâng cao hiệu quả phòng trừ sâu bệnh. .